Alfatestlab offre un pacchetto di analisi di base ad un pacchetto di analisi avanzate, in ogni caso forniamo:
Analisi garantita alla consegna²
²Previo accordo sulla data di spedizione del campione
Il pacchetto di analisi di base comprende:
Concentrazione di EVs ed esosomi³
Alfatestlab fornirà la concentrazione del vostro campione di EVs espressa in numero di particelle per mL, in funzione del diametro idrodinamico, ovvero del numero di particelle per volume per qualsiasi intervallo di dimensioni.
Ogni analisi viene eseguita in 5 repliche e i parametri del diametro idrodinamico forniti sono: modalità, media, d10, d50, d90, deviazione standard. Questa analisi è estremamente utile per confrontare i campioni di esosomi e valutare il numero relativo di particelle in uno specifico intervallo di dimensioni (30-130nm / 130-200nm, ecc.) Inoltre, questi dati di concentrazione espressi in numero di particelle/mL possono essere confrontati con i dati ELISA espressi in proteine/mL.
³Questa analisi richiede campioni purificati
Colorazione di membrana
I dati relativi alla concentrazione di EVs ed esosomi possono essere implementati con etichettatura a fluorescenza DIO, DII o Cell Mask Orange, al fine di segregare i dati delle specie lipidiche rispetto al resto dei componenti della miscela.
Il pacchetto di analisi avanzata fornisce la caratterizzazione multiparametrica di singole EVs
Conteggio, dimensione e fenotipizzazione
Questa analisi non richiede alcuna purificazione: è possibile misurare direttamente il surnatante di colture cellulari, il plasma, il siero, l’urina e altre matrici. Alfatestlab fornirà i dati relativi alle dimensioni (<50 nm) e al conteggio dell’intero campione, espressi in numero di particelle per intervallo di dimensioni. Alfatestlab fornisce servizi di quantificazione delle proteine e di co-localizzazione delle proteine grazie alla cattura antigene-specifica.
Il profilo proteico di membrana standard delle singole EV viene fornito sulla base dei marcatori ubiquitari di tetraspanina CD9, CD63 e CD81 (opzione CD41a). Su richiesta, sono disponibili colorazioni personalizzate per l’analisi di altre proteine di interesse.
Purezza: validazione del metodo di isolamento degli esosomi
Confrontando la quantità di EVs nel fluido biologico grezzo rispetto al campione isolato/purificato, Alfatestlab fornisce lo strumento perfetto per convalidare i metodi di purificazione da colture cellulari con o senza EVs bovine, plasma sanguigno, siero sanguigno, fluido cerebrospinale (CSF), saliva, urina, fluido follicolare, fluido sinoviale, ecc.
Carico e integrità delle EV
In Alfatestlab sappiamo che la comprensione dell’efficienza con cui i farmaci terapeutici vengono caricati nelle EV e della loro purificazione è un’informazione cruciale. Alfatestlab è in grado di fornire misure di proteine esterne e interne a livello di singola vescicola. Le linee guida MISEV 2018 raccomandano il rilevamento delle proteine citosoliche intracellulari come parte dei protocolli standard per la caratterizzazione delle EV. A questo scopo, forniamo la misurazione delle proteine citosoliche intracellulari, tra cui ALIX e Syntenin. Le EV vengono catturate, incubate con un massimo di tre anticorpi o coloranti fluorescenti, che possono essere indirizzati contro la superficie, e quindi permeabilizzate per consentire la rilevazione delle proteine luminali o indirizzare anticorpi specifici al carico delle EV. Le frazioni della sottopopolazione EV possono essere quantificate in termini di numero di vescicole contenenti specifiche proteine di carico.